Preimplantaatiodiagnostiikka Jaana L ä hdetie L ää ketieteellinen genetiikka Turun yliopisto

PGD taustaa ensimm ä inen raportti 1990 laboratorioiden m ää r ä n kasvu hidasta, t ä ll ä hetkell ä n. 50, 17 maassa tutkittavien tautien m ää r ä n kasvu nopeaa IWG perustettu 1990 ESHRE PGD Consortium 1997  valvoo, kehitt ää ja auttaa PGD laboratorioita

PGD:n tarve perinn ö llisen taudin riski  autosomaalisen dominantin, resessiivisen tai X- kromosomaalisen taudin riski  kromosomipoikkeavuuden riski jo koetut raskauden keskeytykset jos raskauden keskeytys ei tule kyseeseen infertiliteetti i ä n aiheuttama aneuploidiariski

Alkiodiagnostiikan menetelmi ä alkiobiopsia  yleens ä 4-8 soluasteella 3. p ä iv ä n kohdalla yksitt ä isen solun analysointi  FISH-menetelm ä t  PCR-menetelm ä t blastomeerin fuusioiminen hiiren tai naudan munasoluun  kromosomianalyysi

PGD (ESHRE) pariskuntaa, 392 PGD-sykli ä 302 alkionsiirtoa 66 raskautta yhteens ä tietoja syntyneist ä 79 PGD- raskauden lapsesta raskauskomplikaatioita 17 % ennenaikainen synnytys 27 %  yksisiki ö isill ä 13 % kaksosilla 73 %

Alkiodiagnostiikan tarkkuus (ESHRE) 61 siki ö t ä ja 11 vastasyntynytt ä 21 istukkan ä ytett ä, 38 lapsivesin ä ytett ä yhteens ä 68:ssa 70 tapauksesta tulos varmistui oikeaksi yksi trisomia 16 l ö ytyi,  haettu X-kromosomaalista incontinentia pigmenti -tautia yksi dystrofia myotonica siki ö l ö ytyi -> raskaudenkeskeytys (1.4 % virhediagnoosin riski)

FISH-menetelm ä t indikaatioalueet:  kromosomipoikkeavuudet  sukupuolen m ää ritys (X-kromos.taudit) kromosomikoettimia usein ainakin 5  13, 18, 21, X ja Y ongelmat:  mosaikismi  translokaatiot vaativat r ää t ä l ö idyt koettimet

PCR-menetelm ä t strategioita yhden solun geenin PCR:ss ä  sis ä kk ä iset alukkeet (nested PCR)  koko genomin monistus ensin, esim. PEP ongelmia  alleelispesifinen monistuminen tai toisen alleelin “ poisputoaminen ” (ADO)  huomattava kontaminaatioriski

Fluoresoiva PCR k ä ytet ää n fluoresoivalla leimalla varustettuja alukkeita PCR-tuotteet analysoidaan esim. sekvensaattorilla  alleelien kokoero todetaan, esim. CF, DM soveltuu monen taudin diagnostiikkaan herkkyys ja nopeus suurempi alleelispes. monistuminen v ä h ä isemp ää

Kvantitatiivinen PCR monistetaan valikoituja kromosomi- spesifisi ä mikrosatelliitteja  multiplex-PCR k ä ytet ää n fluoresoivia alukkeita analysoidaan PCR-tuotteet automaatti- sekvensaattorilla lasketaan piikkien pinta-alasta alleelien suhteet (normaali 1:1, trisomia 2:1)

Vertaileva genominen hybridisaatio CGH ei viel ä k ä yt ö ss ä 1) alkiosolusta monistetaan koko genomi ja leimataan esim. vihre ä ksi 2) terveen henkil ö n genominen DNA leimataan esim. punaiseksi molemmat hybridisoidaan yhdess ä kromosomi- preparaattiin lasilla mikroskoopin kuva-analysaattori laskee vihre ä /pun.- fluoresenssin suhteen:  liikaa vihre ää = esim. ylim ää r ä inen kromosomi  liikaa punaista = puuttuva kromosomi

DNA-sirut vaatii koko solun DNA:n monistamisen siru on yl. kaupallisesti tuotettu ja siin ä on haluttu kokoelma tunnistettavien tautien mutaatioita, esim.  Suomi-siru  kromosomik ä sivarsisiru (tulossa)  DNA-passi (?) siru luetaan automaattisella kuva- analysaattorilla

Kromosomisto esiin uudella tavalla yhdest ä solusta Willadsen ym  ihmisen blastomeeri fuusioidaan naudan munasolun kanssa –2 translokaatiopotilasta –87 solua 64 metafaasia –1 terve siki ö Verlinsky ja Evsikov 1999  ihmisen blastomeeri fuusioidaan hiiren tsygootin kanssa  191 solua, 138 metafaasia (74 %)

I ä n perusteella tehty alkiodiagnostiikka kyseess ä pikemminkin seulonta joissakin keskuksissa jo t ä rkein indikaatioryhm ä geneettinen riski suhteellisen pieni indikaatio: raskaaksitulon mahdollisuuden parantaminen lapsettomuushoidossa

PGD - tarve ja kustannukset arvioitu Englannissa 1999: tarjonta 128 PGD:a /vuosi kysynt ä 256 PGD:a / vuosi saatavuus ep ä tasaista henkil ö - ja laitekustannukset  perustaminen puntaa  k ä ytt ö kulut/vuosi puntaa

Kloonaaminen ja alkiodiagnostiikka alkiotutkijat ja genetiikot vastuussa p ää tett ä v ä indikaatioista lailliset, moraaliset ja eettiset rajat kokonaisen ihmisen kloonaaminen kiellet ää n ‘ varaosien ’ tuottamisen mahdollisuus  sairaiden solujen, kudosten jopa kokonaisten elinten korvaaminen