Lataa esitys
Esittely latautuu. Ole hyvä ja odota
JulkaistuAnna-Leena Karjalainen Muutettu yli 5 vuotta sitten
1
Histologia salasana kbkbkb 1
2
varsinainen sidekudos rusto luu veri Lihaskudos sileä lihaskudos
Johdanto Kirjallisuus Mikrotekniikka Mikroskopointi Soluvälimateriaali Matrix Säikeet Kudostyypit Epiteelikudos Sidekudos varsinainen sidekudos rusto luu veri Lihaskudos sileä lihaskudos poikkijuovainen lihaskudos sydänlihas Hermokudos Elimet, elinjärjestelmät Verenkiertoelimistö Lymfajärjestelmä Iho Aistinelimet Ruoansulatuskanava + rauhaset Hengityselimet Virtsanerityselimet Umpirauhaset Sukupuolielimet 2
3
kr. HISTOS = kudos, LOGOS = oppi Kirjallisuutta
Johdanto kr. HISTOS = kudos, LOGOS = oppi Kirjallisuutta Young & Heath: Wheater’s Functional Histology, A text and colour atlas. Edinburgh, London : Churchill Livingston (4. painos, 2000) Lähitieteet Kehitysbiologia Fysiologia Solubiologia (Mikro)anatomia Patologia Oikeuslääketiede 3
4
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Mikrotekniikka (mikroskooppinen tekniikka, erillinen kurssi) Kudosten rakennetta ei voida tarkastella suoraan mikroskoopissa; tarvitaan sopiva preparaatti ja värjäys MIKROTEKNIKKA Preparaattityypit totaalipreparaatti (esim. 1-soluiset, ohuet kalvot) leikepreparaatti (yleisin) sivelypreparaatti (esim. veri) murskepreparaatti (esim. kromosomipreparaatit) Valmistusvaiheet fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi 4
5
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
estää kudoksen autolyysin (lysosomit) kovettaa kudos kestää leikkauksen edistää värjäytymistä formaldehydi, paraformaldehydi, alkoholi, pikriinihappo, etikkahappo seokset esim. Bouin: pikriinihappo (saturoitu vesiliuos) 75 osaa + formaliini (40 % formaldehydi) 25 osaa + jääetikka (100 % etikkahappo) 5 osaa kudospalan oltava pieni 2-3 mm nopea fikseeraus 5
6
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
valu (petaus) parafiiniin tai muoviin ”blokki” leikkausta varten vaatii veden poiston 30 % alkoholi … abs. alkoholi ksyleeni (ns. nouseva sarja) valu voidaan tehdä myös jäädyttämällä, jolloin fikseerausta ja veden poistoa ei tarvita muoviblokki parafiiniblokki 6
7
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
leikkaus leikkeet/leikenauha valomikroskopia mikrotomilla 1-15 µm, EM << 1µm (ultramikrotomi), jääleikkeet kryostaattimikrotomilla (jäähdytys) 7
8
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
leike terä blokki 8
9
9
10
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Leikkeet kiinnitetään objektilasille (EM:ssa kuparihilalle) esim. munanvalkuais-glyseroli-seoksella lämpöpöydällä (nauhojen oikaisu) Jääleikkeet suoraan lasille Värjäystä varten parafiini yleensä poistettava (värit vesiliukoisia) laskeva sarja (ksyleeni abs. alkoholi…30 % alkoholi vesi) 10
11
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Värjäys perustuu väriaineisiin yleensä aromaattisia orgaanisia molekyylejä molekyylissä kaksi osaa kromofori eli ”värin kantaja” esim. parakinoni, Atso-ryhmiä -N=N-, atsiini, ym. auksokromi: värin sitoutuminen, pysyvyys -COOH, -NH2, -OH -ryhmät happamat, emäksiset värit (= anioniset ja kationiset värit), neutraalit värit peittaus: värien saostus metallisuoloilla (kangasvärjäyksessä ”puretus”) EM-’värit’ esim. osmiumtetroksidi 11
12
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Esimerkki hematoksyliini eosiini 12
13
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
peitinlasi + peitinaine (esim. kanadanbalsami) leikenauha 13
14
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Histokemialliset värjäykset (molekyylien spesifinen osoittaminen) Entsyymihistokemia - entsyymien paikallistaminen kudoksissa entsyymireaktio kytketään värireaktioon Immunohistokemia vasta-aineiden hyväksikäyttö makromolekyylien osoittamisessa Syöpäspesifinen antigeeni, eturauhanen ATP-aasi, lihas 14
15
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Valomikroskooppi yleisin, teoreettinen erotuskyky 0.2 µm erotuskyky riippuu: valon aallonpituudesta, väliaineen taitekertoimesta ja objektiivin avautumiskulmasta tärkeimmät rakenteet havaittavissa ihmissilmin 40x suurennoksella! Fluoresenssimikroskooppi UV-heräte kohteeseen fluoresenssi näkyvän valon alueella autofluoresenssi, väriaineilla aikaansaatu fluoresenssi konfokaalimikroskopia: herätevalo = laser sopii paksuille leikkeille, pistemäinen kohteen valaisu skannaus 15
16
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
konfokaali fluoresenssi 16
17
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Valomikroskoopin sovellutuksia pimeäkenttämikroskooppi faasikontrastimikroskooppi, värjäystä ei tarvita interferenssikontrastimikroskooppi polarisaatiomikroskooppi 17
18
fikseeraus valu leikkaus värjäys mikroskopointi
Elektronimikroskopia läpivalaisu-EM (transmission-EM, TEM) pyyhkäisy-EM (Scanning-EM, SEM) – ”pintakuva” omat leike- ja värjäystekniikat elektronien läpäisevyys (elektroni-opaakkisuus) ’väri’ TEM SEM 18
19
Mikroskooppi Leeuwenhook 1700-luku Tuma: Brown 1831
Historiaa Mikroskooppi Leeuwenhook 1700-luku Tuma: Brown 1831 Soluteoria: Schwann & Schleiden 1838/39 Ihmisen histologian oppikirja: Henle 1841 Kudostyypit: Wirchow 1863 Mikrotomit, leikkeiden valmistus: 1800-luvun loppu Elektronimikroskopia: 1940/50-luku Entsyymihistokemia: 1950-luku Immunohistokemia: 1960/70-luku In situ mRNA-hybridisaatio: 1980-luku 19
20
Kudos = solut + soluvälimateriaali (matrix, matriksi)
Matrix ei varsinaisesti elävää materiaalia Aina solujen tuottamaa Kudosten ja tukirangan kovuus ja lujuus luu > rusto > verkkomainen sidekudos Toimii diffuusiotienä Väliaineen 2 perustyyppiä amorfinen eli homogeeninen säikeinen 20
21
Joko suhteellisen jäykkiä (geeli) tai juoksevampia (sooli)
2.1. Amorfinen väliaine Joko suhteellisen jäykkiä (geeli) tai juoksevampia (sooli) Päätehtävä diffundoitumistie, adheesio Erotetaan kaksi komponenttia: perusaine + sementti Yleensä seoksia glykoproteiinit + kollageeni (molekyylimuodossa) hiilihydraatit heksosamiinien ja heksuronihappojen polymeereja = glykosaminoglykaanit (GAG) = mukopolysakkaridit lipidit vesi 21
22
GAG:t jaetaan ei-esteröityneisiin ja esteröityneisiin Ei-esteröityneet
hyaluronihappo: glukuronihapon ja asetyyliglukosamiinin polymeeri M kondroitiini: glukuronihappo + N-asetyyligalaktosamiini M Esteröityneet (-OSO3H) kondroitiinisulfaatti (galaktosamiinin, glukuronihapon ja sulfaatin polymeeri), dermataanisulfaatti keratohyaliini ihon keratiini sulfatoituneet muodot jäykempiä geelit (sementtiaine) liittyvät sulfaatin avulla proteiineihin proteoglykaanit (vanh. mukoproteiinit), runkona hyaluronihappo 22
23
kondroitiinisulfaatti
hyaluronihappo proteoglykaani M 108 EM-kuva kondroitiinisulfaatti 23
24
useimpien elinten sidekudos-osassa
Esiintyminen: hyaluronihappo useimpien elinten sidekudos-osassa lisäksi nivelpussit, napanuora, silmän lasiainen viskoosinen fluidi, sitoo helposti vettä, joka voi poistua viskositeettia säätelee hyaluronidaasi-entsyymi (hydrolysoi) kondroitiinisulfaatti rusto, luu, aorta, sydänläpät, sarveiskalvo, napanuora ’kondro’ = rusto (kr. chondro-) ’hyalo’ = kr. lasi ’muko’ = lima (lat. mucus) Väliaineen valontaitto yleensä sama kuin vedellä! 24
25
luun proteiini on pääosin kollageenia
2.1. Säikeet Huom: Biologiassa syy = solu, säie = fibrilli (lääketieteessä eri käytäntö, esim. lihassäie = lihassolu) Kollageenisäikeet tavataan kaikissa sidekudostyypeissä, eläinkudosten yleisin proteiini, jopa 25 % kaikista proteiineista luun proteiini on pääosin kollageenia ainakin 27 eri tyyppiä: tyyppi I 70 % koko elimistön kollageenista, 90 % luun kollageenista Lat. collum = liima, kollageeni = liimaa tuottava 25
26
Kollageeni + raskasmetallisuolat tai tanniini erittäin vaikealiukoinen yhdiste (nahan parkitseminen!) Tanner = parkitsija 26
27
perusrakenne 3 peptidiketjun helix, joka kolmas ah = glysiini GLY-X-Y
X usein proliini, Y hydroksiproliini n ah:n 1-kertainen helix 3-kertainen helix = tropokollageeni, gly helixin sisällä pituus 280 nm, läpimitta 1.4 nm tropokollageeni mikrosäikeet (micofibrils) ¼ limittäisyys pituus useita µm, läpimitta 0.3 µm mikrosäikeet + ristisidokset kollageenisäikeet läpimitta 1-12 µm 27
28
tropokollageeni (+telopeptidit)
mikrofibrilli kollageenisäie 28
29
verkkomaisia, haaroittuvia
B. Retikuliinisäikeet verkkomaisia, haaroittuvia muodostavat pieniä verkostoja verisuonten, lihassolujen, rasvasolujen ym. ympärille ”epäkypsää” kollageenia, muodostuu tropokollageenista C. Elastiset säikeet paljon mm. löyhässä sidekudoksessa valtimoiden ympärillä, keuhkoissa joustavia, kumimaisia elastiini-proteiini, M , 8 ah, ”random-coil”, 3-ulotteinen rakenne oskilloi joustavuus molekyylisillat lysiinin muodostamia (lysyylioksidaasi-entsyymi) 29
30
Kollageenisäikeet iho suolilieve SEM 30
31
retikukulaarisäikeet (imusolmuke)
elastiset säikeet (valtimon seinämä) 31
Samankaltaiset esitykset
© 2024 SlidePlayer.fi Inc.
All rights reserved.