Esittely latautuu. Ole hyvä ja odota

Esittely latautuu. Ole hyvä ja odota

Mikroskooppisten preparaattien valmistus

Samankaltaiset esitykset


Esitys aiheesta: "Mikroskooppisten preparaattien valmistus"— Esityksen transkriptio:

1 Mikroskooppisten preparaattien valmistus
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

2 Valomikroskopia Parafiinitekniikka
1. fikseeraus: tappaa, kovettaa, säilyttää rakenteen (alkoholi, formaldehydi, etikkahappo) 2. veden poisto: alkoholisarja 70 %  absoluuttinen  ksyleeni 3. imeyttäminen parafiiniin (+65°C) 4. valu parafiiniblokkiin 5. leikkaus mikrotomilla 6. kiinnitys objektilasille 7. parafiinin poisto: ksyleeni  alkoholi 8. värjäys BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

3 Valomikroskopia 2 - leikkaus kryostaattimikrotomilla (-20  –30°C)
parafiini voidaan korvata muovilla denaturaatio: entsyymit eivät toimi leikkeessä jääleiketekniikka - kudos jäädytetään metallilieriöön nestetypen (-193°C) avulla - leikkaus kryostaattimikrotomilla (-20  –30°C) - värjäys substraatti (entsyymit toimivat), taustaväri entsyymien histokemiallinen osoittaminen BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

4 Parafiinileikkeiden leikkaaminen
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

5 EM-näyte hilalla Ohuet leikkeet ( nm) otetaan kuparihilalle (ø 2-3 mm) (100 mesh  reikäkoko) värjäys 3 mm BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

6 Muita preparaattien valmistusmenetelmiä
Sivelypreparaatti esim. veripisara levitys objektilasille fikseeraus kuivaamalla, alkoholilla Murskepreparaatti (squash) näyte obj.lasille painetaan peitinlasilla murskaksi imeytys EtOH (60-70 %) värjäys BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

7 Värjäysmenetelmät Parafiinileikkeet
värjäämätön leike ei yleensä erotu valomikroskoopissa (ei absorptioeroja) faasikontrasti-, interferenssimikro-skoopissa  ilman värjäystä biologiset väriaineet orgaanisia molekyylejä molekyyli sisältää: kromoforin (= värin kantaja) auksokromin (kiinnittää värin soluun, määrää vain kiinnittymiskohteen) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

8 Värjäysmenetelmät 2 auksokromi esim. –COO- + H+
karboksyyliryhmä on hapan  kiinnittyy emäksisiin molekyyleihin (esim. tumassa) väri syntyy valkoisen valon eri aallon-pituuksien erilaisesta absorboitumisesta solun eri osien välillä BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

9 Värjäysmenetelmät 3 EM-värjäys
perustuu elektronien erilaiseen absorboitumiseen näytteen eri osissa  epäorgaaninen komponentti värissä väriaineet: fikseeraus OsO4 jo värjää lyijysitraatti uranyyliasetaatti BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

10 Histokemia Entsyymien histokemia
entsyymejä tuhansia, joista 60 voidaan osoittaa histokemiallisesti keinotekoinen entsyymi värin substraatti esiaste epäorg. suola + diatsosuola VÄRI + värin esiaste BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

11 Histokemia 1 Kyyhkyn (40 vrk) rintalihaksen sukkinaattidehydrogenaasin, aktiivisuus 1.25x10 (Ahti Pyörnilä) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

12 Histokemia 2 Rotan m. soleuksen ATPaasiaktiivisuus, pH 10.4, 10x40x0.8 (Ahti Pyörnilä) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

13 Histokemia 3 Viiriäisen m. supracoracoideus, fosforylaasi-aktiivisuus, 0.8x40 (Ahti Pyörnilä) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

14 Histokemia 4 Rotta m. soleus ATPaasi, ph 4.6, 10x40x0.8
(Ahti Pyörnilä) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

15 Histokemia 5 Varpusen m. pectoralis SDH, 0.8x40 (Ahti Pyörnilä)
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

16 Immunohistokemia 1 kaniin injisoidaan tutkittavaa makromolekyyliä (proteiini, glykoproteiini)  toimii antigeenina valkosolut tuottavat vasta-ainetta (antibody) vereen suora histokemiallinen värjäys: vasta-aine eristetään ja merkitään - esim. fluoreskeiini  fluoresenssimikroskopia BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

17 Immunohistokemia 2 - peroksidaasi  histokemiall. osoitus
- kolloidinen kulta, ferritiini  EM epäsuora immunokemiallinen värjäys: prim. vasta-ainetta ei merkitä, vaan sille kehitetään oma vasta-aine (esim. lampaassa tai vuohessa; ns. antikaniini-IgG) - anti-kaniini-IgG merkitään kuten edellä - etu: voidaan paikantaa mikä tahansa kanissa kehitetty vasta-aine BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

18 Spesifisen proteiinin lokalisointi EM:n avulla
Leikkeessä näkyy kultasaostuma Peroxisomes BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

19 Lokalisointi 2 Antibody reagoi ensin spesifisen antigeenin kanssa (esim. katalaasi) Sitten leike käsitellään proteiini A kompleksilla, joka saadaan esim. bakteerista (Staphylococcus aureus), ja kultapartikkeleilla Sidotaan antibodyn FC-domainiin Saadaan näkymään EM:ssä BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

20 Autoradiografia molekyylin kulku ja reaktiot solussa
kudokselle, leikkeelle, soluviljelmälle tms. annetaan lähtöainetta, jonka jokin atomi on vaihdettu radioaktiiviseksi isotoopikseen esim. 3H tritium, 14C ”radiohiili”, 32P jne. tutkittavaa ainetta annetaan näytteelle lyhyen ajan  pulssi BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

21 Autoradiografia 2 merkattu ”kuuma” molekyyli käyttäytyy solussa kuten normaali ”kylmä” molekyyli  voidaan paikantaa radioaktiivisuuden perusteella leike tms. (yl. lasilla) kastetaan filmiemulsioon  radioaktiivinen säteily ”valottaa” filmin (yl. kestää päiviä tai viikkoja)  radioakt. solut ja solun osat näkyvät tummina pisteinä (AgBr-kiteet) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

22 Autoradiografia 3 yleensä lisäksi normaali histologinen värjäys
esim. halutaan tutkia DNA-synteesiä: käytetään 3H-tymidiiniä  paikantaminen  AgBr-kiteiden määrä osoittaa DNA-synteesin aktiivisuuden! BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

23 Yksittäisen molekyylin monitorointi
Figure Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

24 Soluviljely 1885 Roux osoitti, että kanan alkion soluja voidaan elättää liuoksessa putkissa, maljoissa = in vitro ”organismissa itsessään” = in vivo monet solun ominaisuudet säilyvät, esim. - fibroblastit erittävät kollageenia - lihassolut liittyvät yhteen  ”lihas”, supistukset - hermosolut kasvattavat haarakkeita BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

25 Soluviljely 2 primaariviljelmä: suoraan kudoksissa
sekundaariviljelmä: aliviljelmät edellisestä yleensä voidaan viljellä ohuita suikaleita (eksplantteja); keskusta kuolee usein solut kiinni viljelymaljan pohjaan, vain syöpäsolut voivat kasvaa vapaana suspensiona BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

26 Soluviljely 3 kasvualustat spesifisiä
aluksi plasmahyytymissä, 1970-luvulla keinotekoiset alustat, kasvutekijät (esim. NGF = nerve growth factor) tavallisesti solulinja kuolee rajallisen jakautumismäärän jälkeen (tiheysinhibiitio) on tuotettu useita solulinjoja, jotka jakautuvat loputtomasti BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

27 Soluviljely 4 yleensä kasvainperäisiä esim. HeLa-solulinja (ihmisen epiteeli), 3T3 (hiiren fibroblasti jne. soluviljelyn etuna mm. solujen homogeenisuus soluja voidaan edelleen lisätä kloonaamalla kantasolut  identtiset solut Henrietta Lacks - 31-vuotias kohdunkaula-syöpäpotilas v v kloonattu solulinja (sitkeä, kasvaa myös suspensioviljelmissä BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

28 Henrietta and David Lacks
Henrietta and David Lacks. She died in 1951, while the cancer that killed her lives on in HeLa. CREDIT: COURTESY THE LACKS FAMILY AND CROWN L. K. Boerner Science 327, (2010) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011 Published by AAAS

29 It is hard to imagine a scientist who hasn't heard of HeLa cells
It is hard to imagine a scientist who hasn't heard of HeLa cells. Rapidly reproducing and amazingly robust, these cervical cancer cells have become indispensable in modern biomedical research. Their nearly ubiquitous cell line has been used in innumerable experiments that required a human cell culture. It has served in work ranging from the creation of a polio vaccine, to the development of leukemia treatments, to discoveries in cloning and gene mapping. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

30 Soluviljely 5 periaatteessa mikä tahansa solu voidaan saada jakautumaan loputtomasti ns. neoplastisella transformaatiolla aiheutetaan yl. viruksella, esim. Rousin sarkooma -virus soluhybridisaatio, esim. hiiren kasvainsolu virus, PEG ihmisen fibroblasti ns. heterokaryon mitoosit hybridisoluja BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

31 Soluviljely 6 hybridilinjat menettävät usein kromosomeja (syy tuntematon)  etu: geenejä voidaan paikantaa kromosomeihin hybridoimalla yksittäisiä lymfosyyttejä voidaan tuottaa tarkkoja vasta-aineita lähes rajattomasti  monoklonaaliset vasta-aineet - käytetään histokemiassa BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

32 Solujen, soluorganellien ja makromolekyylien jaottelu
soluosien jaottelu ultrasentrifuugilla kiihtyvyys (keskipakovoima) jopa g (1 g = n. 980 cm/s2) aluksi kudoksen homogenointi Jaottelu- eli differentiaali-sentrifugaatio erottelu perustuu sentrifugaatiovoimaan ja –aikaan partikkelin koko määräävä (ks. taulukko) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

33 Jaottelutaulukko (molekyylikoon hiukkaset) sytosoli (liuos)
vapaat ribosomit, mikrosomit /1-2 h mitokondriot, lysosomit 10 000/20 min kokonaiset solut, tumat 1000/5-20 min sakan sisältö g/aika BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

34 Sakkaroosigradientti
Sample is layered on top of gradient Larger particle Smaller particle Centrifuge Centrifugal force Sucrose gradient BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

35 Swing-out sentrifugointi
Particles settle according to mass BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

36 Homogenointi 600 rpm Teflon Extract pestle Tissue-sucrose homogenate
Tube is moved slowly up and down as pestle rotates Teflon pestle Extract Tissue-sucrose homogenate BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

37 Sentrifugointi 1 Supernatant 1 Low speed centrufugation 1000g x 10 min
Pellet 1 Unbroken cells, nuclei, cytoskeletons BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

38 Sentrifugointi 2 Supernatant 2 Pellet 2 Medium speed centrifugation
g x 20 min. Mitochondria, lysosomes, and microbodies BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

39 Sentrifugointi 3 Supernatant 3 Soluble fraction of sytoplasm (cytosol)
High speed centrifugation g x 60 min Pellet 3 Microsomes, consisting of smooth and rough endoplasmic reticulum, Golgi, small vesicles BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

40 Sentrifugointi 4 Supernatant 4 Very high speed centrifugation
g x 3 hrs Pellet 4 Ribosomes, viruses, macromolecular complexes BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

41 Tiheysgradienttien muodostaminen
Tiheysgradientti-sentrifugaatio sentrifugiputkeen raskaan suolan (esim. CsCl, cesiumkloridi) tai keinotekoisten partikkelien väkevä liuos  partikkelit asettuvat ”ajon” aikana putken pohjaa kohti ominaispainoa vastaaviin väkevöityihin vyöhykkeisiin perustuu siis partikkelien tiheyteen gradientti voidaan muodostaa myös etukäteen esim. kerrostamalla erivahvuisia sakkaroosiliuoksia BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

42 Gradientin muodostaminen
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

43 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

44 Fraktionti tiheysgradientin mukaan
Collect fractions and do assay Hole Increasing mass of particles BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

45 Makromolekyylien analysointi
yl. proteiinit, nukleiinihapot Röntgendiffraktio aallonpituus n. 0,1 nm  erinomainen resoluutio soveltuu kiteisiin, eristettyjen makromolekyylien tutkimiseen (esim. virukset) yksittäisten atomien sijainti molekyylissä erittäin aikaa vievä metodi BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

46 Röntgensädekristallografia
Perutz & Kendrew 1950-luvulla Voidaan määrittää proteiinien kolmiulotteisia rakenteita Nykyisin tunnetaan yli 8000 proteiinin 3D-rakenne  = nm, atomit erottuvat proteiinikiteestä Proteeinikiteen atomit lähettävät x-säteitä Siroava säteily detektorille tai filmille BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

47 Jos näyte on järjestäytyneenä kiteenä diffraktiopisteet.
Kapea yhdensuuntainen rtg-sädekimppu ohjataan puhdistettuun proteiiniin. Suurin osa menee sellaisenaan läpi, mutta osa siroaa näytteen sisältämien atomien mukaan. Jos näyte on järjestäytyneenä kiteenä diffraktiopisteet. Kuvassa ribuloosibifosfaattikarboksylaasi, merkitystä CO2 kiinnittymiseen fotosynteesissä Difraktiomallin ja ah-sekvenssin avulla saadaan molekyylimalli (D) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

48 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011
Table 8-2 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

49 Elektroforeesi Elektroforeesi (+kromatografia)
perustuu molekyylien liikkumiseen sähkökentässä molekyylien koko, varaus ja väliaine vaikuttavat kulkeutumiseen paperielektroforeesi: RNA selluloosa-asetaattikalvo (veren valk.aineet) SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) erottelee aina 10 ng:aan asti BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

50 SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate polyacrylamide-gel-electrophoresis)
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

51 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

52 Molekyylibiologisia menetelmiä
Sekvensointi ja yhdistelmä-DNA-tekniikka sekvensointi: proteiinien aminohappojärj. ja nukleiinihappojen emäsjärj. määritys  tietoa molekyylien osuudesta solun tapahtumissa DNA:n hybridisaatio-tekniikat: Southern blotting  DNA-fragmentit Northern blotting  RNA Western blotting (immunoblotting)  proteiinit BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

53 Southern blottaus Tekniikka, jolla havaitaan tietty DNA-sekvenssi geeli- elektroforeesin jälkeen. Vastaavalla tekniikalla löydetään RNA-sekvenssi (Northern blotting) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

54 Western blottaus Proteiinien tunnistusmenetelmä, jossa elektroforeesin avulla erotetut proteiinit siirretään kalvolle paikannettavaksi. Proteiinit paikannetaan kalvolta yleensä tiettyyn proteiiniin sitoutuvalla, leimatulla vasta-aineella. Proteiinien tunnistuksen lisäksi proteiinituotannon suhteellista osuutta voidaan mitata densitometrisesti. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

55 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

56 Northern blottaus määritys tehdään us. solun kokonais RNA:na
denaturointi esim. formaldehydilla  estää vetysidosten muodostumisen emäsparien välille  näin kaikki RNA on lineaarista, kiertymätöntä eristys koon mukaan geelielektroforeesilla siirretään nitroselluloosasuodattimelle käsitellään merkatulla RNA probilla, autoradiografiaan BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

57 Polymeraasi ketjureaktio (PCR)
Valitun DNA-segmentin monistaminen koeputkessa Step 1 DNA kaksoisketju avataan kuumentamalla (95ºC), jäähdytetään 60ºC:seen Lisätään primeri 1 ja 2 Step 2 DNA-oligonukleotidit antavat primerien hybridisoitua DNA:n komplementaariseksi sekvenssiksi (cDNA) molemmissa ketjuissa BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

58 Lisätään DNA polyme-raasi (Taq)
Step 3 Lisätään DNA polyme-raasi (Taq) Lisätään deoksiribo-nukleosidi trifosfaatit: dATP, dGTP, dCTP, dTTP) DNA syntetisoidaan alkaen primerista BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

59 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011
Figure 8-45a Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

60 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011
Figure 8-45b Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

61 Tuotteen fraktiointi BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

62 Molemmissa tapauksissa nukleotidin sekvenssi pitää ainakin osittain tuntea etukäteen.
Figure Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

63 Kromosomaalinen DNA puhdistetaan Primeri lisätään Useita PCR-syklejä
PCR:n käyttö genomin kloonin saamiseksi. Kromosomaalinen DNA puhdistetaan Primeri lisätään Useita PCR-syklejä Vain DNA:ta monistetaan  selektiivisesti vain puhdasta kromosomaalista DNA:ta saaliina cDNA-kloonauksessa RNA:n puhdistaminen Lisätään primeri Käänteistranskriptaasi Lisätään kakkosprimeri Yksijuosteinen DNA monistuu monen PCR-syklin avulla Sykli aloitetaan uudelleen. Kuumennus 95ºC:seen, jäähdytys 60ºC:seen Äsken syntetisoitu toimii uuden templaattina jne. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

64 Erottelu geelielektroforeesilla
BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

65 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

66 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

67 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

68 cDNA:n synteesi kokonais-RNA eristetään ja puhdistetaan
Valmistetaan DNA:n kopio mRNA:sta BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

69 Geeninsiirto geeninsiirto: 1. eristetään DNA solusta
2. pilkotaan restriktioentsyymillä 3. DNA:n eristäminen elektroforeettisesti 4. plasmidin aukaiseminen restriktioentsyymillä 5. halutut DNA:n palaset aukaistuun plasmidiin (tarttuvat vapaisiin emäsryhmiin) 6. plasmidin siirto bakteeriin BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

70 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

71 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

72 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

73 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

74 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

75 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

76 Transgeeninen hiirimalli
KO = knock out BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

77 Microarray, Geenisiru (gene chip)
Geenilastu eli DNA-siru (aiemmin piialustalla) (DNA-microarray) Käytössä USA:ssa 1990-luvun puolivälissä Siru on leikelasi (25 mm x 75 mm), johon voidaan pieninä pisaroina sijoittaa jopa geenin dna-pätkää noin 150 m etäisyydelle toisistaan. Pisara vastaa siis yhtä geeniä. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

78 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

79 BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

80 Geenisiru 2 Tämän geenipisaran päälle pudotetaan sitten tutkittavia näytteitä, ja syntyvästä reaktiosta tehdään johtopäätöksiä. Edeltää kymmenien tuhansien geenien monistaminen DNA (sis. komennon, mitä tehdään)  mRNA (tieto siirtyy lähettiRNA:lle  proteiini (valmiste l. tuote) Oivallus: mRNA voidaan koodata takaisin cDNA:ksi, jota otetaan sirulle BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

81 Geenisiru 3 Laitteet Robotti ja siihen yhdistetty pienen pieni nestettä siirtävä teräskynä Lasertekniikkaan perustuva lukija. Tulosten analysointi vaatii lisäksi huomattavaa laskentakapasiteettia BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

82 Geenisiru 4 Varsinainen tutkittava näyte ja referenssinäyte
Tutkittava näyte esim. syöpäsolu ja referenssinäyte normaalisolu. Toinen näytteistä värjätään fluorisoivalla värillä vihreäksi ja toinen punaiseksi. Sirulle lisätään molempia näytteitä ja annetaan niiden reagoida sirulle kiinnitettyjen geenien kanssa. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

83 Geenisiru 5 Osa pisaroista muuttuu punaisiksi ja osa vihreiksi
Värien perusteella voidaan päätellä, onko geenin aktiivisuus näytteen vaikutuksesta lisääntynyt tai vähentynyt. Jos jokin geeni esimerkiksi on hyvin aktiivinen syöpäsolussa, voidaan tutkia, mikä tämän geenin merkitys on syövän puhkeamiselle. BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011

84 Geenisiru 6 Sirutekniikan avulla voidaan myös tutkia geenien vuorovaikutuksia - geenien välisiä viestintäreittejä ja –verkkoja. - yhteyksien syy-seuraus-suhteita Matemaattinen mallintaminen (bioinformatiikka) BIOLOGIAN LAITOS, SEPPO SAARELA, 2011


Lataa ppt "Mikroskooppisten preparaattien valmistus"

Samankaltaiset esitykset


Iklan oleh Google